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ATP可以从微生物培养物中通过溶解细胞提取-荧光显微镜

2020-03-11 11:422780厂家库小编006

ATP可以从微生物培养物中通过溶解细胞提取-荧光显微镜                              多反应在理论上应能用于ATP 的测量,最简单荧光素——含氮和硫的芳香属分子,在镁的存在下能与ATP 和虫荧光酶反应形成一种酶——虫荧光素——单磷酸腺苷的中间物,此中间物在氧气的存在下分解产生游离的单磷酸腺苷,无机磷和光,在反应的最初15秒钟发射出明显的光,之后发射光持续平稳1-3 分钟,发射光用分光计或闪烁计数器测量并对ATP 含量作图绘成标准曲线,如果使用的是纯虫荧光素酶和虫荧光素而不是荧火尾部的不纯物,光输出有所扩大并且是恒定的。
    ATP 可以从微生物培养物中通过溶解细胞提取,对于纯培养物,可用煮沸、加酸和氯仿来提取ATP ,在土壤和沉积物中,煮沸不能使细胞完全溶解,说明细胞受到粘土胶体的保护,0.5MNaHCO 中加氯仿对钙质土中ATP 的提取是有效的,但ATP 酶不是都受到抑制,结果所提取的ATP量很低,阴离子和阳离子混合提取剂是有用的,大多数提取剂在一定程度上抑制虫荧光素酶反应,因此,提取溶液在放入ATP 光度计之前尽可能多烯释。
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