重组DNA分子包括至少5个步骤-生物细胞电子显微镜

重组DNA分子包括至少5个步骤-生物细胞电子显微镜

新的重组DNA分子的产生包括至少5个步骤。
　　(1)DNA的准备。现在，DNA通常是通过聚合酶链反应(PCR)产生的。PCR技术在第6章讲述过，是在恒温条件下DNA聚合酶与正向、反向引物进行变性、复性、延伸的循环周期的过程。PCR的结果是DNA的大量扩增与复制。模板DNA最好是来源于通过反转录酶作用于mRNA得到的cDNA，这样避免了扩增序列中存在的内含子。有时DNA也可来源于限制性内切核酸酶的酶切产物。
　　(2)限制性内切核酸酶切割。含有黏性末端的特定长度的DNA片段的产生是DNA重组技术所必需的。这样插入物(DNA片段)可以与含有相应黏性末端的载体连接。现在，通过PCR产生的DNA片段通常含有限制性内切核酸酶位点，从而使后面的克隆反应更容易进行，并且很多种限制性内切核酸酶都可以从公司购买。
　　(3)DNA片段的连接。在克隆过程中插人物与载体DNA结合的过程叫做连接。如果没有DNA片段的共价连接以及环状DNA的形成，后面的转化反应效率会很低。