海洋微型生物研究光学显微镜-显微技术

海洋微型生物研究光学显微镜-显微技术
微型生物个体极小，成为阻碍研究发展的拦路虎。微型生物的研究进程在很大程度上取决于技术的进步。从技术手段上说，微型生物研究舞台上演了三部曲：以显微技术为基础的观察分析，以流式细胞技术为基础的快速定量，以分子生物学技术为基础的多样性分析与功能基因分析。显微技术(Microscopy)  没有显微镜就没有海洋微型生物研究。  20世纪80年代以前，在微型生物研究技术舞台上显微镜是绝对的主角，直到今天，显微技术仍然是微型生物研究必不可少的手段。这里只简介最常用的透射电子显微技术(Transmission E1ectronic Microscopy，TEM)和表面(落式)荧光显微技术(Epifluorescence Microscopy，EFM)。    TEM是了解生物体亚显微结构的可靠方法。大洋环境中聚球藻的发现和确认就是TEM观察的结果。TEM在原绿球藻的发现和定种上也起到了至关重要的作用。目前，海洋病毒的观察、分类工作仍主要由TEM来完成。TEM方法可以观测到包含有病毒粒子的尚未裂解的细胞，为微食物环(Microbialloop)和病毒环(Virus 100p)的研究提供了重要参数，具有其他方法无法超越的优势。但是TEM由于其制样和观测的复杂性，不适用于自然生态调查中超微型浮游生物群落的定量研究。    与TEM相比，EFM观测需要的水样量小，制样过程简单，观察和操作快速。采用荧光染色的方法，EFM能区分并定量细菌、蓝细菌和真核细胞。尽管细胞经过固定染色处理后大小会改变，尤其是甲醛固定会造成细胞收缩，染色后细胞大小的测定也会由于荧光的光晕而受到干扰，但是EFM在细胞的大小和形态观测上仍具有一定的优势。值得注意的是，在没有改进的EFM技术规程中，原绿球藻往往会被误计为细菌其在贫营养大洋造成的细菌正误差可达30％