污泥的培养(培菌)快速简便的特点-图像显微镜

污泥的培养(培菌)快速简便的特点-图像显微镜

活性污泥的培养(培菌)
　　当质粒较大时可考虑用膜吸附法或用非离子型去污剂初步抽提，然后用CsCl法进一步纯化。相反，当质粒DNA的宿主菌为JM系列或HBl01、TGl等衍生菌株时不宜用CsCl法纯化，这是因为这些菌中含有大量的糖类物质，CsCl离心后会在超螺旋质粒DNA位置形成一条致密与模糊的区带，难以完全除尽这些糖类物质，从而造成抑制后续酶反应进行。除糖类物质外，这类菌株中还含有较多核酸酶，也不适于用煮沸法、酚／氯仿等快速法抽提质粒。因为以上方法虽然步骤简单但往往不能使DNA酶彻底变性失活，严重时甚至使抽提产物降解。当质粒DNA要长期使用时也不宜用快速法抽提，以防止保存过程中残留的微量核酸酶降解DNA。此外，选择DNA提取方法还须考虑质粒DNA的用途。如DNA仅用于抽提后检测插入片段时，则可选用快速的酚／氯仿法。如果插入片段用于标记探针且与同类宿主菌的DNA杂交时，就不能选用此法，这是因为酚／氯仿抽提质粒时未能将所有染色体DNA全部变性除去，酶切后回收的插入片段中可能含有极微量的染色体DNA。相反，如果用于酶切鉴定时，这些未除尽的染色体DNA很少，不会干扰反应，这时选用快速提取法便显出快速简便的特点，特别有利于大量筛选重组子。当然，除了标记探针外，质粒用于测序等时需要高纯度DNA，应该应用碱法、CsCl法或膜吸附法提取。总之，选择抽提方法时要根据具体情况而定。