经分离后的质粒,可用琼脂糖电泳加以鉴定

经分离后的质粒,可用琼脂糖电泳加以鉴定
　　质粒的分离大致包括细胞的离解、蛋白质和RNA的去除、染色体DNA与质粒DNA分离等几个步骤。其中以质粒DNA与染色体DNA相分离的步骤最为关键。
　　经分离后的质粒，可用琼脂糖电泳加以鉴定。不同质粒由于其结构不同，其电泳迁移速度也不同，因而可进行分离和检测。如果把已知分子量的DNA片段与待测分子量的DNA片段同时电泳，并比较电泳迁移速率，可测定后者的分子量。质粒DNA经限制性内切酶水解后，从凝胶电泳谱上出现的区带数目、每个带中相应DNA的大小，可以推测出酶切位点位置和数目，确定该质粒的限制性酶切图谱。
　　使用质粒DNA小量制备的碱法，是一种非常可靠的方法，现也有使用更简化的步骤。具体改进是加入溶液I、Ⅱ、Ⅲ离心后的上清液直接用异丙醇沉淀，沉淀溶解后即用RNA酶A处理，然后用酚／氯仿以及氯仿抽提，最后用乙醇沉淀。经改进后的碱法可节约实验时间，并能保证所抽提DNA的质量。