细胞影像绿色荧光细胞和发育生物分析显微镜

细胞影像绿色荧光细胞和发育生物分析显微镜
作为活细胞影像工具的GFP    水母(Aequorea victoria)绿色荧光蛋白(GFP)已经成为研究细胞和发育生物学很有价值的一种工具。紧凑的桶状结构和3一缩氨酸发色团是形成功能荧光蛋白所必需的，但是它具有很强的延展性，可发生氨基酸替代。因此，发色团内部或周围随机和直接突变会改变激发和发射光谱，并产生较亮的分子。WtGFP的吸收峰为397nm和475nm。504 nlTl是另外一个绿色的激发峰值。65位丝氨酸的替代使WtGFP的主要和次要吸收峰变成了一个单一的489nm的峰，但仍为绿色荧光。这类分子的普遍形态EGFP，即加强的GFP通常还有其他氨基酸替代和密码子置换，可在哺乳动物细胞高效表达。T203Y以及$65G突变可使吸收和发射波峰发生红向移动，产生黄色荧光蛋白(EYFP)。发色团内Y66若被组氨酸或色氨酸取代，可使吸收和发射峰值发生蓝向移动，分别产生蓝色和蓝绿色荧光蛋白(EBFP和ECPF)。    水母突变体的光谱未发生红移，没有超出黄色蛋白的范围，但是其他海洋生物的荧光蛋白延伸到了红色荧光区。例如，从异辐海葵(Hetractis crispa)提出的HcRed蛋白和从珊瑚(Discosoma)克隆出的DsRed蛋白。随着缓慢的繁殖这些蛋白质首先疲软，然后在低浓度下发生自我交结，但是氨基酸的替代可以减少繁殖的次数，并破坏四聚体产生二聚体甚至单体。