SEC实验的层析柱选择-细胞提取液测定各组分

SEC实验的层析柱选择-细胞提取液测定各组分
   常规SEC的层析柱选择    进行常规SEC，必须选择适当的空柱。典型柱的大小应是内径1～1．6cm，长度为50～10℃m。附件包括填料储器，此储器可装柱一次完成。为进行精确的温度调控或在较冷的室温下操作，层析柱的外面可套上温度调节套。然而，由于实验目的的不同，常在室温下操作，需加人适当的杀菌剂。短时间(10～15min)的体积排阻高效液相层析(SE-HPLC)不应在低温下进行。确定峰值    洗脱时，每一蛋白峰的洗脱体积，要以标准蛋白柱的洗脱体积作为标准，即时测定，通常用紫外监视器测定210～220nm或280 nm处的光吸收值。然而，对于细胞提取液，利用部分收集器收集到的洗脱液，逐一测定各组分来确定目的蛋白的洗脱体积，这些测定包括电泳、免疫印迹法、酶活性的测定和配体结合。为便于每一组分的测定，这些组分要有足够的量，因此应将每一部分最小化，以减少估计洗脱体积时出现的误差。例如，0．05～o．2 m1的组分洗出体积适合用SE-HPLC柱，将有5～10ml的内水体积，而对于常规柱，1 m1的组分洗出体积，就可将洗脱体积(Vre)的误差减少到1％，此时的内水体积约有lOOml。