生物的连续培养-细胞生物量的测定图像显微镜

生物的连续培养-细胞生物量的测定图像显微镜

    细胞生物量的测定    微生物生长不仅表现在数量增多，也表现在质量增加，也可通过测定微生物质量的变化釆研究其生长；最直接的方法是测定细胞干重：首先离心收集液体培养物中的细胞，然后洗涤细胞，之后将细胞置于烤炉烘干称重。称干重法尤其适用于测定真菌的生长，但此方法费时，而且不够灵敏。对细菌而言，由于细胞个体重量很小，至少需要离心几百毫升的培养物才能得到足够的量用于测定。    光线照射到细胞上会发生散射，而且细胞个体在大小上基本一致，所以光散射的程度与细胞浓度呈正比，人们可利用光比浊法测定微生物生长，该方法更为迅速、敏感。当细度浓度达到10的7次方个／mL时，培养基就会呈现轻微的混浊，浓度进一步提高，浊度增加，能透过的光线就越少。光散射程度可用分光光度计监测，在低吸光值范围内，吸光值与细胞浓度呈线性关系，只要细胞浓度达到能产生可测定的浓度时，就可很容易地利用分光光度计比浊法测定微生物的生长。    如果某物质在各细胞中的含量一样，细胞构造中这种物质的总量就与总的微生物细胞的生物量直接相关。例如，从一定体积培养物中收集细胞，洗涤后测定总蛋白质量或总氮量，蛋白质量越高，表明培养物中微生物生物量越多。与此类似，测定叶绿素含量可检测藻类数量，而ATP的含量可用来估计活的微生物的生物量。   微生物的连续培养    浊度与微生物生物量测定．通过测定吸光值可以确定微生物生物量，当细胞数量增加导致浊度升高寸，更多的光线发生散射，通过分光光度计测得的吸光值增加：分光光度汁有两组刻度，底下刻度为吸光值，顶上刻度为透光率，吸光值增加时透光率下降；   微生物的连续培养    以上讨论了在封闭系统进行的分批培养，即不补充新的营养物质，也不排除产生的废物，对数期仅维持几代就进人稳定期。若在一个开放系统中培养微生物，在培养过程中不断补充新的营养物质并排出废物，使该系统环境条件保持恒定，这个系统就称为连续培养系统(continuous culture system)，在该系统中，微生物的生长可保持在对数期，生物量浓度在较长时期内保持恒定。恒化器    常用的连续培养系统主要有  (1)恒化器(chemostat)和(2)恒浊器(turbidostat)。利用恒化器进行连续培养时，向培养容器中加入无菌新鲜培养基的速度与排出含菌培养物的速度相同，培养基中某种必需营养物质(如某种氨基酸)的浓度控制在限定范围，这样，系统内微生物生长速度由新鲜培养基加入系统的速度决定，最终细胞浓度依赖于限制性营养物质的浓度。营养物质更新的速度以稀释率